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幽门黄曲霉抑菌测试——复达客户检测案例

2022年01月13日,客服中心接到安徽某公司关于菁海抑菌菜板原料的检测,接到反馈后,实验室工程师第一时间与客户进行详细沟通,情况如下:


客户背景


客户是一家新材料研发公司,想要对自己家的四款菁海抑菌菜板原料的黄曲霉(B1.B2.G1.G2) 幽门螺旋杆菌 (抑菌防霉)进行检测,通过网络平台找到我们,咨询具体项目并出具专业的第三方检测报告。


样品名称


菁海抑菌菜板原料 1  菁海抑菌菜板原料 2  菁海抑菌菜板原料 3  菁海抑菌菜板原料 4


客户需求


根据客户提供的样品,确定样品具体测试的条件时间和项目,然后提供相关的样品进行测试,出具专业的第三方检测报告。


解决方案


沟通客户寄送样品,实验室接收到样品及说明书后开始进行最终的确认测试。客户提供的测试要求相对而言比较严格,收到样品后我们立刻沟实验室进行测试的协调,实验中我们使用了不同菌种、不不同模拟环境进行测试。从而顺利进行测试。


测试项目:根据样品说明书确定了测试项目:有黄曲霉(B1.B2.G1.G2) 幽门螺旋杆菌抑菌防霉效果,部分测试结果如下:


测试结果


一、菌株:


黄曲霉 AS 3.3950


二、黄曲霉孢子菌悬液的制备:


1.取菌种斜面,加入3~5mL无菌纯水,用无菌接种环在试验菌种的表面轻刮。


2.将孢子提取液注入250mL的锥形瓶,瓶内装45mL 无菌纯水和50粒~70粒直径为5mm的实心玻璃球。


3.剧烈振荡锥形瓶,以打碎孢子块并使孢子从菌丝体中释放出来。


4.用装有6m厚玻璃棉的玻璃斗,将霉菌孢子悬浮液过滤到锥形瓶中,以去除大的菌丝体碎片和琼脂块。


5.将过滤后的孢子悬浮液离心,弃掉上层液。


6.在剩余物中加入50mL生理盐水重新悬浮并离心。将获得的每种霉菌孢子以这种方法离心3次(直到上层液变清)。


7.选适宜稀释度分别取1ml接种琼脂平皿,计算菌液浓度。


三、试验程序


试验方法:《消毒技术规范》2002年版 2.1.8.7 振荡烧瓶试验。


试验过程:


1.试验样品和阴性对照样品组(HDPE 高密度聚乙烯树脂)经121℃灭菌15min。


2.将 0.75g样品放入 250ml 的锥形瓶中,分别加入 70ml PBS 和 5ml 菌悬液,使菌悬液在PBS中的浓度为 1×104cfu/ml~5×104cfu/ml。


3.将锥形瓶固定于振荡摇床上,在作用温度为 20℃~25℃的条件下,以 300r/min振摇 2min。取0.5ml混合液加到4.5ml PBS中,10倍稀释至适宜浓度,分别吸取1ml,置于两个平皿,用凉至40~45℃的孟加拉红(虎红)琼脂培养基作倾注,转动平皿,使其充分均匀,琼脂凝固后翻转平板,置25℃±2℃培养3~5d,做活菌计数,作为振荡前菌落数。


4.将 0.75g 样品放入上述含有 70 ml PBS和 5ml 菌悬液的锥形瓶中,然后将锥形瓶固定于振荡摇床上,在作用温度为 20℃~25℃的条件下,以 300r/min 振摇1h。用PBS作适当稀释。分别吸取振荡前和振荡后样液各 1.0ml,以琼脂倾注法接种平皿,每个样液接种两个平皿,进行活菌培养计数,作为振荡后菌落数。


5.试验同时设阴性对照样品组(HDPE 高密度聚乙烯树脂)和不加样品组(空白组)。操作程序均与试验组相同。不加样品组分别取 5ml 菌悬液和70ml PBS 加入 250ml 锥形瓶中,混匀,分别于振荡前和振荡后1h,各取适当稀释度进行活菌培养计数。


6.试验重复3次,按下列公式计算抑菌率:


1.png


式中:X为抑菌率,%;为样本振荡前平均菌落数,cfu/ml;为样本振荡后平均菌落数,cfu/ml。


结果


幽门黄曲霉抑菌测试.png

幽门黄曲霉抑菌测试.png


结论


在本次试验条件下,按照《消毒技术规范》2002年版 2.1.8.7 振荡烧瓶试验判定:


1.本实验中不加样品组的菌落数在1×104cfu/mL~5×104cfu/mL之间,且样品振荡前后平均菌落数差值在10%以内,试验有效。


2.试验组抑菌率与对照样品组抑菌率的差值<26%,产品无抗菌作用。


一、菌株:幽门螺旋杆菌 BNCC 354364


二、试验程序


试验方法:《消毒技术规范》2002年版 2.1.8.7 振荡烧瓶试验。


试验过程:


1.试验样品和阴性对照样品组(HDPE 高密度聚乙烯树脂)经121℃灭菌15min。


2.将 0.75g样品放入 250ml 的锥形瓶中,分别加入 70ml PBS 和 5ml 菌悬液,使菌悬液在PBS中的浓度为 1×104cfu/ml~5×104cfu/ml。


3.将锥形瓶固定于振荡摇床上,在作用温度为 20℃~25℃的条件下,以 300r/min振摇 2min。取0.5ml混合液加到4.5ml PBS中,10倍稀释至适宜浓度,分别吸取1ml,置于两个平皿,用凉至40~45℃的哥伦比亚血琼脂培养基作倾注,转动平皿,使其充分均匀,琼脂凝固后翻转平板,置35℃±2℃ 5%CO2培养3~5d,做活菌计数,作为振荡前菌落数。


4.将 0.75g 样品放入上述含有 70 ml PBS和 5ml 菌悬液的锥形瓶中,然后将锥形瓶固定于振荡摇床上,在作用温度为 20℃~25℃的条件下,以 300r/min 振摇1h。用PBS作适当稀释。分别吸取振荡前和振荡后样液各 1.0ml,以琼脂倾注法接种平皿,每个样液接种两个平皿,进行活菌培养计数,作为振荡后菌落数。


5.试验同时设阴性对照样品组(HDPE 高密度聚乙烯树脂)和不加样品组(空白组)。操作程序均与试验组相同。不加样品组分别取 5ml 菌悬液和70ml PBS 加入 250ml 锥形瓶中,混匀,分别于振荡前和振荡后1h,各取适当稀释度进行活菌培养计数。


6.试验重复3次,按下列公式计算抑菌率:


1.png


式中:X为抑菌率,%;为样本振荡前平均菌落数,cfu/ml;为样本振荡后平均菌落数,cfu/ml。


结果


幽门黄曲霉抑菌测试.png

幽门黄曲霉抑菌测试.png

幽门黄曲霉抑菌测试.png


结论


在本次试验条件下,按照《消毒技术规范》2002年版 2.1.8.7 振荡烧瓶试验判定:


1.本实验中不加样品组的菌落数在1×104cfu/mL~5×104cfu/mL之间,且样品振荡前后平均菌落数差值在10%以内,试验有效。


2.试验组抑菌率与对照样品组抑菌率的差值<26%,产品无抗菌作用。


客户反馈


客户收到报告后说会根据结果针对自己的产品进行改良,感谢我们在产品研发过程中给出的建设性建议,并表示产品改良后会继续找我们合作,并为我们的服务提出的大大的好评。