液相柱后衍生测试——复达客户检测案例
2021年09月22日,客服中心反馈武汉某大学客户有对通过柱后衍生对样品的抗氧化性能研究的测试需求,接到反馈后,分析实验室工程师第一时间与客户进行详细沟通,了解到情况如下:
客户是武汉某大学的学生,在实验研究过程中想探究样品中各种有机酸阿魏酸、咖啡酸、香豆酸、原儿茶酸、香草酸等八种物质的抗氧化能力,设计实验如下:液相梯度洗脱使不同种类的有机酸分离,这些有机酸具有紫外吸收,可被 DAD 检测器检测出,经液相分离的各种有机酸流入柱后衍生仪反应池,同时仪器将 DPPH 试剂泵入反应池中。这些有机酸具有自由基清除能力,能够与 DPPH 自由基发生反应。DPPH溶液呈深紫色,在可见光区 517 nm 处具有最大吸收;与有机酸反应后,颜色变浅,可见光吸收强度降低,在谱图中表现出负峰,然后将将有机酸紫外吸收峰与反应后 DPPH 的吸收峰对应起来,直观地反映这些有机酸的抗氧化能力。相比于柱前衍生,柱后的在线衍生方式能够实时反映被分离物的抗氧化能力,避免受外界因素的影响从而影响结果判断。
多酚
样品液相色谱仪柱后 DPPH 试剂在线衍生谱图测试。
沟通客户寄送样品,分析实验室接收到样品后对样品进行拍照,根据客户提供的方案和预实验条件,我们配制八种物质的标准品混合溶液,进行液相DAD测试,确定每个物质的保留时间,然后在搭建的液相-衍生仪-DAD检测器的仪器上进行测试,通过改变 DPPH 试剂的流速、混合标准溶液的进样量等各项实验条件摸索最佳的实验方案,最后使用该方法对六批样品进行测试,得到测试谱图。
客户对我们开发的方法以及测试谱图很满意,完全满足客户的要求并达到预期结果,同时我们也将实验条件、仪器型号、测试方法等数据提供给客户,以便于客户使用自身的仪器能够重复试验以及发表论文使用。