2021年11月13日，客服中心反馈广州某公司生产一款新型牙膏，希望上市前进行产品功效检测，情况如下：

客户背景

广州某公司研发清洁的产品，在10月份研发出一份牙刷，需要进行功效实验初步测试。

样品名称

金银花益生菌洁齿膏

客户需求

抗敏功效检测。

解决方案

1. 检测样品信息

1.1测试样品：称取样品0.3264 mg，加入2.94 mL DMEM培养基，配成浓度为10%（w/w）。随后用DMEM培养基依次稀释至测试浓度。

2. 对照组信息

2.1 阳性对照（PC）：1 μg/mL地塞米松

称取100 mg地塞米松，加入1 mL甲醇溶解，即为100 mg/mL地塞米松储备液，再使用超纯水稀释为1 μg/mL的工作浓度。

3. 试验接受标准

NC（阴性对照组）与M（模型组）相比有统计学差异（t检验），M（模型组）与PC（阳性对照组）相比有统计学差异（t检验）

3.1实验原理

本实验通过使用LPS诱导的人牙龈上皮细胞作为体外炎症细胞模型，通过ELISA试剂盒检测细胞上清液中分泌的炎症因子（IL-1α），从而评估待测样本的抗炎抗敏作用。

参考文献：

[1] Basso,  G F. , Soares, et al. Effect of LPS treatment on the viability and chemokine synthesis by epithelial cells and gingival fibroblasts. 

[2] Giacomo Picciolo, Federica Mannino, Natasha Irrera, ,Letteria Minutoli, et al. Reduction of oxidative stress blunts the NLRP3 inflammatory cascade in LPS stimulated human gingival fibroblasts and oral mucosal epithelial cells[J]. Biomedicine & Pharmacotherapy, 2021, 146: 112525.

3.2实验方法

CALT/TM/SOP269-01人牙龈上皮细胞抗炎试验标准操作规程。

4. 实验材料

4.1 细胞系：人牙龈上皮细胞     来源：北纳创联，传代数：12

4.2 培养液：含10%胎牛血清的DMEM培养基（FBS，Gibco，Lot：2275120）

4.3 测试条件：培养箱温度37±1℃，湿度90±5%，CO2 5±1%

4.4 脂多糖（LPS）：用超纯水稀释至1 mg/mL储备液，-20℃保存（Lot：20211025）

4.5 MTT溶液：用PBS将MTT配制成浓度为5 mg/mL的MTT储备液，使用0.22μm的针头滤器过滤除菌，-20℃保存（Lot：20210924）。

4.6 IL-1α ELISA试剂盒，购自欣博盛生物，货号：EHC176，Lot：H211103-176a。

5. 试验步骤

5.1 细胞毒性筛查

5.1.1将培养的细胞接种于96孔板中，0.8-1.0×104个/100 μL/孔，然后，置于培养箱中培养18-24 h。

5.1.2去除原培养液，每孔加入100 μL不同浓度样品稀释液，在培养箱中暴露24±0.5 h。

5.1.3各孔中加入20 μL MTT溶液，在37℃下孵育3 ±0.5 h。然后去除MTT溶液，各孔中加入100 μL DMSO，避光振荡10-15 min后在570 nm波长下测定吸光度值。

5.2 抗炎测试

5.2.1 常规培养细胞，将细胞以密度为2.0～3.0×105个/mL/孔接种于12孔板，返回培养箱培养18-24h。

5.2.2取出培养板，弃去孔中原培养液，阴性对照（NC）加入DMEM培养液，模型对照组（M）加入LPS（10 μg/mL）的DMEM培养液，样品组（TA）每孔加入LPS（10 μg/mL）以及含不同浓度的测试样品的DMEM培养液，阳性对照组（PC）每孔加入LPS（10 μg/mL）以及含地塞米松（1 μg/mL）的DMEM培养液，每组3个复孔，培养24±1 h。

5.2.3 收集上清液，-80℃保存，细胞因子采用ELISA试剂盒进行测定。

6. 数据分析

数据采用SPSS进行分析，并以均值±标准差表示，如果p<0.05考虑差异具有统计学意义。

6.1细胞活性以空白对照组（Control）细胞活性为100%，计算各组相对细胞活性（Viability）。

客户反馈

客户对于结果很满意并且希望后期的研究样品还可以继续合作，协助完成其他产品的研发。